pcr试剂的作用(简述pcr的原理及各试剂的作用)
本文目录一览:
- 1、PCR的原理是什么,它有什么用途?
- 2、急切求RT-PCR各种试剂的作用!!!
- 3、pcr试剂盒中加入尿苷糖基酶具有防污染作用对吗
- 4、PCR试剂有哪几类,怎样区分
- 5、药厂的pcr试剂是什么意思?是什么产品吗?
- 6、什么是PCR试剂?
PCR的原理是什么,它有什么用途?
聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction),简称PCR,是一种分子生物学技术,用于放大特定的DNA片段。可看作生物体外的特殊DNA复制。
DNA聚合酶(DNA polymerase I)最早于1955年发现 ,而较具有实验价值及实用性的Klenow fragment of E. Coli 则是于70年代的初期由Dr. H. Klenow 所发现,但由于此酶不耐高温,高温能使之变性, 因此不符合使用高温变性的聚合酶链式反应。现今所使用的酶(简称 Taq polymerase), 则是于1976年从 温泉中的细菌(Thermus aquaticus)分离出来的。它的特性就在于能耐高温,是一个很理想的 酶,但它被广泛运用则于80年代之后。PCR最初的原始雏形概念是类似基因修复复制,它是于1971年由 Dr. Kjell Kleppe 提出。他发表了第一个单纯且短暂性基因复制(类似PCR前两个周期反应)的实验。而现今所发展出来的PCR则于1983由 Dr. Kary B. Mullis发展出的,Dr. Mullis当年服务于PE公司,因此PE公司在PCR界有着特殊的地位。Dr. Mullis 并于1985年与 Saiki 等人正式表了第一篇相关的论文。此后,PCR的运用一日千里,相关的论文发表质量可以说是令众多其它研究方法难望其项背。随后PCR技术在生物科研和临床应用中得以广泛应用,成为分子生物学研究的最重要技术。Mullis也因此获得了1993年诺贝尔化学奖。
[PCR原理]
[编辑本段]
DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链,在DNA聚合酶与启动子的参与下,根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。在实验中发现,DNA在高温时也可以发生变性解链,当温度降低后又可以复性成为双链。因此,通过温度变化控制DNA的变性和复性,并设计引物做启动子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。
但是,DNA聚合酶在高温时会失活,因此,每次循环都得加入新的DNA聚合酶,不仅操作烦琐,而且价格昂贵,制约了PCR技术的应用和发展。
发现耐热DNA聚合同酶--Taq酶对于PCR的应用有里程碑的意义,该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活,不需要每个循环加酶,使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本,PCR技术得以大量应用,并逐步应用于临床。
急切求RT-PCR各种试剂的作用!!!
A液:变性液 裂解细胞或细菌等等,使所有DNA变性
B液:醋酸钠溶液 中和A液至中性,
C液:酚/氯仿/异戊醇混合液(50:49:1) 抽取RNA
D液:异丙醇
E液:75%乙醇 都是沉淀提取的RNA
F液:DEPC处理的灭菌去离子水 无RNA酶的水,防止RNA降解
G液:RNA酶抑制剂 防止RNA降解
H液:反转录反应液 使反转录酶具有最大活性的优化缓冲液
I液:反转录酶 使RNA翻转录成DNA
J液:PCR反应液 使Taq酶具有最大活性的优化缓冲液
K液:Taq DNA聚合酶(0.5u/µl) 扩增你所要的DNA片段
L液:矿物油 保持PCR反应管上层不会散热
M液:50倍TAE电泳缓冲液 电泳(鉴定扩增dna片段)所需的缓冲液。
N液:溴化乙锭溶液 嵌入DNA双链中的荧光分子,可在紫外灯下显桔红色。
0液:上样缓冲液 DNA电泳时所需的处理样品的缓冲液,兼有指示电泳进行状态的作用。
pcr试剂盒中加入尿苷糖基酶具有防污染作用对吗
不对,pcr试剂盒中加入尿苷糖基酶具有防污染作用,但是没有防菌的作用。因为在一般实验室条件下,很难达到无菌的状态
PCR试剂有哪几类,怎样区分
PCR试剂有哪几类,怎样区分
1.提取试剂,包括了各种提取dna的常用试剂,和纯化dna所用的试剂
2.pcr扩增试剂:主要是taq酶,dntp(四种碱基),缓冲试剂(buffer),引物
3.产物检测试剂:琼脂糖,聚丙烯酰胺凝胶,aps,tmed,eb等等吧
药厂的pcr试剂是什么意思?是什么产品吗?
PCR是一种DNA体外快速扩增的技术,PCR试剂就是进行PCR实验用的试剂。
什么是PCR试剂?
PCR试剂简单的理解就是用于做PCR的试剂。
实际做PCR的试剂很多,在这儿可以理解为达到PCR级别的试剂。试剂中不应该存在对PCR反应有影响的杂质。象核酸、核酸酶,如果是水的话,盐离子尽可能的小,最好是超纯水。象一些盐类,分析纯的就可以达到要求。
如果想做PCR,买点TAQ酶,dNTP就够了,引物找公司合成,模板自己提取。