美天旎官网去除细胞磁珠分选（美天旎 磁珠）
本文目录一览：
- 1、免疫磁珠捕获菌去跑PCR,如何把菌从免疫磁珠上分离下来?
- 2、免疫磁珠细胞分选的简介
- 3、磁珠分选后磁珠去哪里了
- 4、如何选择恰当的MACS分选柱
- 5、细胞磁珠分选的 MACS Cell Separation Columns 可以重复使用吗
免疫磁珠捕获菌去跑PCR,如何把菌从免疫磁珠上分离下来?
你的意思是用免疫磁珠的方法分离出目标细菌，然后以目标细菌的DNA做模板跑PCR对吧？不妨用磁珠分离出来细菌后，用试剂盒提取一下DNA，再用DNA直接做PCR。如果你担心磁珠干扰，再提取DNA的时候可以再破碎细胞后，用磁铁吸一下，把上清取出来。
免疫磁珠细胞分选的简介
把细胞用超级顺磁性的 MACS MicroBeads （MACS微型磁珠）特异性地标记，磁性标记完后，把这些细胞通过一个放在强而稳定磁场中的分选柱。分选柱里的基质造成一个高梯度磁场。被磁性标记的细胞滞留在柱里而未被标记的细胞则流出。当分选柱移出磁场后，滞留柱内的磁性标记细胞就可以被洗脱出来，这样就完全可以获得标记和未标记的两个细胞组份。
超顺磁性的MACS MicroBeads 的体积很小，其直径约为50nm，体积约小于真核细胞的一百万份之一，可与病毒的大小相比。标记细胞上的微型磁珠即使在扫描电镜照片上也几乎看不到。磁性抗体和磁性标记物间的反应可在几分钟内完成。
由于微型磁珠的体积极小，所以不会对细胞造成机械性压力，而且使孵育时间短，操作过程快。MicroBeads 形成一个稳定的胶体液，它们在磁场中既不沉淀又不凝聚。微型磁珠的大小和它的组成成份（氧化铁和多糖）使其可被生物降解，且不会激活细胞或影响细胞的功能和活力，细胞的生理功能也不变。磁珠不需要去除，因此，阳性分选出的细胞（即磁性标记细胞）可立即用于分析和随后的实验。
用MACS 细胞分选系统可以分离出非常纯的细胞群体，而且有极好的回收率和存活率。依据细胞频率和标记表达水平的不同，MACS分离细胞的纯度可达95%-99.9%，回收率90% 。
磁珠分选后磁珠去哪里了
1. 待分选细胞中如有贴壁细胞,建议在分选前先贴壁培养去除,或者提高EDTA浓度;
2. 抗体包被磁珠对死细胞常有非特异性结合。因而分选前去除死细胞;
3. 新鲜分离骨髓细胞,先用胶原酶、DNA酶、胰酶联
如何选择恰当的MACS分选柱
分选柱（Column）是MACS技术的核心，其特点如下：
填充有不同规格的铁珠，可分选或者去除10^7-10^10细胞；
表面亲水包被，不损伤细胞，同时保证流速；
可以将磁场放大1000-10000倍，因此只需极少的细胞表位被识别即可被磁场捕获，从而为后续实验预留足够
抗原表位
，如
磁珠
分选后的细胞无需切除磁珠即可直接染流式抗体，而不受影响。
美天旎的分选柱分几类，如MS、LS、LD级autoMACS
column
等，那么，这些有什么区别呢，您在实验中又该如何去选择适合您的分选柱呢？
我们知道，美天旎的MACS分选策略有阳性分选、去除分选，那我们就按两种分选策略来分析如何选择恰当的分选柱：
一、阳性分选
1、要分选的细胞数量：
如下图所示：MS柱容纳的最大细胞上样量是2×10^8细胞（既包含阳性细胞又包含阴性细胞），而其能捕获的阳性细胞最多是10^7。
2、目的细胞是常见细胞还是稀有细胞
为了在分选稀有细胞（表达频率〈5%）时得到较更高的纯度，您可以使用两个分选柱：用一根分选柱进行一次分选后，阳性成份再过一次新的分选柱。
3、大体积的细胞
另外，如果您要分选的目的细胞是体积较大的特殊细胞，如
原生动物
细胞、人皮肤郎罕式细胞、
鼻咽癌
细胞、
心肌细胞
等，那推荐您使用Large
cell
column。因为大细胞柱的铁珠间隙足够大，容许这些特殊的大体积细胞顺利通过。
二、去除分选
去除分选中需要考虑以下几个因素：
1
您使用MACS
isolation
kits
或MACS
microbeads吗？
2
抗原表达强还是弱呢？
3
您需要更高的纯度还是
回收率
呢？
4
您需要分选多少细胞？
根据这几个因素，您可以按下图的标识来选择合适的去除分选柱。
细胞磁珠分选的 MACS Cell Separation Columns 可以重复使用吗
最好不要重复用。本来就是一次性的东西。
理论上来说，反复冲洗后柱子可以恢复原样，但是之前过滤的东西可能有些物质物理吸附在柱子上。之前分选中吸附柱子的杂质，是否会影响重复使用，不好说；分选效率也不好说。
之前我曾经用这个重复分过骨髓，还是能够分离出目的细胞，但是分离效率什么的没具体测过，没把握。
